سوال: آیا FCS نسبت به FBS فاکتور رشد بیشتری دارد؟ اصولا چه تفاوتی بین این دو وجود دارد؟ ما فیبروبلاست جوجه را با FBS به مدت 3 روز کشت دادیم ولی افزایش آشکاری در تعداد سلول ها مشاهده نشد. لطفا توضیح کاملی در این زمینه به ما بدهید.
آریافن: FCS و FBS یکسان هستند و هیچ تفاوتی بین آنها وجود دارد. متاسفانه بسیاری از مراکز بزرگ نیز از این نکته خبر ندارند. برای تهیه این سرم، پس از کشتار گاو باردار جنین سه ماه آن را برداشته و با فرو کردن سوزن به قلبش خون را می گیرند. بعد از سانتریوفیوژ و فرآوری های دیگر آن را به بازار عرضه می کنند. این دو اسم بجای هم بکار می روند، برخی معتقدند که اصولاً FCS (Fetal calf serum) یک اصطلاح نادرست می باشد بعنوان مثال شما هیچ وقت نمی گوئید سرم جنینی نوزاد (fetal infant serum) بلکه می گوئید fetal human serum البته کلمه calf برای سرم های Calf serum و New born calf serum بدرستی به کار رفته است.
سوال: من تصادفاً یک بطری FBS را بمدت یک شبانه روز در دمای اتاق جا گذاشتم، آیا این سرم قابل استفاده می باشد یا نه؟
آریافن: اگر درب بطری سرم را قبلا باز نکرده اید می توانید با خیال راحت از آن استفاده کنید، تنها ایرادی که بر این سرم وارد است اینست که تاریخ انقضای این سرم کمی پائین تر از تاریخ لیبل می باشد.
آریافن: اگر درب بطری سرم را قبلا باز نکرده اید می توانید با خیال راحت از آن استفاده کنید، تنها ایرادی که بر این سرم وارد است اینست که تاریخ انقضای این سرم کمی پائین تر از تاریخ لیبل می باشد.
عیب یابی در کشت سلول، دلایل احتمالی و راه حل ها:
مشکل: تغییر سریع PH در محیط
دلایل احتمالی و راه حل :
1- فشار نامناسب CO2
الف ) افزایش یا کاهش غلظت CO2 در انکوباتور بر اساس غلظت سدیم بیکربنات محیط. برای غلظت های 2 تا 3.7 گرم بر لیتر سدیم بیکربنات بترتیب مقادیر 5 تا 10 درصد CO2 بکار میرود.
ب) می توان از محیط های غیر وابسته به CO2 استفاده کرد.
2- محکم بودن بیش از حد درپوش فلاسک کشت :
باید به میزان یک چهارم دیگر در فلاسک شل شود.
3- کافی نبودن بافر بیکربنات:
اضافه کردن بافر HEPESبا غلظت نهایی 10 تا 20 میلی مولار
4- نامناسب بودن نمک های محیط:
استفاده از محیط Earle’s salts-based medium در فضای دارای CO2 و یا استفاده از محیط دارای Hanks در قضای معمولی.
5- آلودگی های باکتریایی، مخمری یا قارچی:
اوت کردن کشت و محیط
مشکل: تغییر سریع PH در محیط
دلایل احتمالی و راه حل :
1- فشار نامناسب CO2
الف ) افزایش یا کاهش غلظت CO2 در انکوباتور بر اساس غلظت سدیم بیکربنات محیط. برای غلظت های 2 تا 3.7 گرم بر لیتر سدیم بیکربنات بترتیب مقادیر 5 تا 10 درصد CO2 بکار میرود.
ب) می توان از محیط های غیر وابسته به CO2 استفاده کرد.
2- محکم بودن بیش از حد درپوش فلاسک کشت :
باید به میزان یک چهارم دیگر در فلاسک شل شود.
3- کافی نبودن بافر بیکربنات:
اضافه کردن بافر HEPESبا غلظت نهایی 10 تا 20 میلی مولار
4- نامناسب بودن نمک های محیط:
استفاده از محیط Earle’s salts-based medium در فضای دارای CO2 و یا استفاده از محیط دارای Hanks در قضای معمولی.
5- آلودگی های باکتریایی، مخمری یا قارچی:
اوت کردن کشت و محیط